聚丙烯酰胺樣品的準(zhǔn)備和收集
保持樣品（生物液體）溫度為4℃。0.3ml甘油和2.7ml樣品在分離前混合5分鐘。然后把處理好的樣品加入到電泳緩沖液的上層。這些蛋白在此電泳緩沖液中不是帶負(fù)電（PI<10.0）就是帶負(fù)電（PI>10.0），因此在電場(chǎng)中不是從正極遷移到負(fù)極就是從負(fù)極遷移到正極。已分離的蛋白分子用特殊的生理洗脫液連續(xù)洗脫，并用分部收集器收集。整個(gè)分離系統(tǒng)必須在4℃冰箱中進(jìn)行。
純化的，半純化的和未處理的樣品都可以用于QPNC。樣品分離純化中應(yīng)該避免類似于蛋白質(zhì)沉淀等過程以防止蛋白變性。化學(xué)穩(wěn)定的金屬蛋白可以用非變性的凝膠滲透層析來(lái)進(jìn)行進(jìn)一步純化。
1.3.4 定量和鑒定
Fe， Cu， Zn， Ni， Mo， Pd， Co， Mn， Pt， Cr， Cd和其它金屬輔因子可以通過ICP-MS（Inductively coupled plasma mass spectroscopy，電感耦合等離子體質(zhì)譜）來(lái)定性和定量。因?yàn)镻AGE條帶的高純度和選擇性凝集，相關(guān)的結(jié)構(gòu)可以用非變性條件下的NMR來(lái)分析。
1.3.5 應(yīng)用
QPNC的應(yīng)用對(duì)象為分子量6-200kDa的酸性、堿性和中性金屬蛋白。在測(cè)定血液或其它臨床樣品中獨(dú)立的金屬蛋白結(jié)構(gòu)和功能關(guān)系方面具有重要應(yīng)用，因?yàn)椴徽_的金屬陪伴蛋白的折疊。例如超氧化物歧化酶（SOD）的銅陪伴蛋白出現(xiàn)在這些基質(zhì)中或許預(yù)示著神經(jīng)病變疾病如肌萎側(cè)索硬化病等。QPNC-PAGE，SEC，ICP-MS和NMR等技術(shù)的連用可以得到病人或潛在的病人液體基質(zhì)中相關(guān)金屬蛋白的生理狀態(tài)的結(jié)構(gòu)。這一技術(shù)可以提高蛋白錯(cuò)折疊相關(guān)疾病的診斷和治療水平。news.yudamai.cn
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